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上海撫生ELISA流程的說明
點擊次數(shù):1118 更新時間:2019-07-05

 

                                        上海撫生ELISA流程的說明

   上海撫生物科技有限公司是一家專注于生物的技術(shù)企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的、銷售。并代理銷售,致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué) ELISA試劑盒等生物科技實驗需求。目前很多客戶因為對品牌的信任度問題,公司仍然是一個非常好的選擇上海撫生ELISA試劑盒,是 你不二的選擇。

剩余的試劑盒材料要妥善保存

標(biāo)準(zhǔn)品分裝后按說明書要求的溫度保存,這樣可以避免污染,對要求冷凍保存的標(biāo)準(zhǔn)品還可以避免反復(fù)凍融;酶標(biāo)板放回錫箔紙袋,加入干燥劑,封緊封口,4℃保存。忌未將酶標(biāo)板*平衡至室溫,就放回錫箔紙袋,因為此時由于溫度差,酶標(biāo)板上會有水汽,不利于穩(wěn)定保存。

加樣要快速準(zhǔn)確,避免氣泡

加樣時間宜控制在 15 分鐘內(nèi)。加樣前要將樣本混勻,特別是凍存后融化的樣本(自然融化的血清等樣本會有分層現(xiàn)象),應(yīng)上下顛倒充分混勻,注意動作輕緩,避免產(chǎn)生氣泡。如凍存融化后的樣本有沉淀,可以再次離心。整個加樣過程都要注意避免產(chǎn)生氣泡。氣泡會影響蛋白的相互結(jié)合,而影響反應(yīng)進(jìn)行。

孵育時要保證溫度均勻,防止揮發(fā)變干

孵育時壓緊封口膜。多塊板一起實驗時,要平放各板,不要疊放,以免因溫度不均造成漂移或邊緣效應(yīng)。

洗板機(jī)的應(yīng)用

使用洗板機(jī),不但可以降低勞動強度,而且有利于保證 ELISA 測試的穩(wěn)定性。目前的全自動洗板機(jī)不但具有很多實用的洗滌動作,如底部沖洗,兩點吸液,震動,交叉吸液;還可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)沖洗壓力,沖洗距離,沖洗時間等參數(shù)。通過優(yōu)選這些動作和參數(shù),能保證良好的洗滌效果。洗板機(jī)的性能對于結(jié)果準(zhǔn)確性影響也很大,好的洗板機(jī)要保證洗板后的殘留液盡可能的少,一般不超過 2μL,以洗滌后用人工拍板墊紙不濕為準(zhǔn)。應(yīng)定期檢查抽吸針頭是否堵塞。洗液如果含有吐溫,應(yīng)隨用隨配。

手動洗板的操作指南

加洗液要快速,沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應(yīng)新鮮配制,以免被其他試劑污染,或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板,選用無粉塵和碎屑的吸水紙。需要用力拍板,使孔內(nèi)沒有可見液體掛壁;但也不能太重,不能讓樣品干太久。酶標(biāo)板拍干后立即做后續(xù)的加液。

顯色反應(yīng)的關(guān)鍵點

ELISA 實驗是個酶促底物顯色反應(yīng),隨時間增加,顯色變深,所以選擇*佳時間終止反應(yīng)是得到準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)的曲線和樣本濃度的重要因素。終止過程要*。使用的 TMB 底物時*終止點是黃色,不會有任何程度的藍(lán)色或綠色,終止過程中必要時可以震蕩 96 孔板,或用槍頭抽吸混勻(終止液含強酸,避免腐蝕)。

 數(shù)據(jù)分析

按照說明書推薦的數(shù)據(jù)分析方法做曲線擬合及分析。說明書中的標(biāo)準(zhǔn)曲線是在的實驗室中,由非常有經(jīng)驗的操作人員得到的結(jié)果??蛻舻臉?biāo)準(zhǔn)曲線和說明書中的標(biāo)準(zhǔn)曲線可能存在不同,但不等于不好。通常判斷標(biāo)準(zhǔn)曲線合格的標(biāo)準(zhǔn)為::背景OD 值 <0.2;點 OD 值>1.0;相關(guān)系數(shù) R2 接近或等于 1。只要滿足這些條件的標(biāo)準(zhǔn)曲線都是可以使用的。

 

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